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技术指标

外观:白色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性: ≥20U/mg 酶粉;过氧化氢酶: ≤0.03%;NADH/NADPH oxidase:≤0.01%

酶学性质

来源:微生物;分类: EC 1.7.3.3; 分子量:40 kDa(SDS-PAGE); 等电点: 5.1;Km值:2.1×10-5 M(Urate); 抑制剂: Fe3+,Co2+,Cu2+,Mn2+,Zn2+; 最适:pH 8.5; 最适温度:37℃; pH稳定性5.5-10.0(25℃,16 h); 热稳定性 60℃ 以下稳定(pH 8.5,30 min);稳定性:-25~-15℃ 静置保存 12 个月保持; 80% 以上活性;保护剂:硼酸盐、EDTA 及非离子型表面活性剂.

用途: 用于尿酸试剂的研发和大量配制。

活性测定方法: Uric acid+O2+2H2O Allantoin+CO2+H2O2尿酸(Uric acid)的量可用分光光度计在290nm下检测。

酶活定义: 单位酶活定义为在下述反应条件下,每分钟氧化1μmol尿酸所需的酶量。

试剂准备

酶稀释液:在 800 mL 双蒸水中溶解 3.09 g 硼酸,0.37 g EDTA·Na2·2H2O 和 0.01 g TritonX-100,用 NaOH 调节 pH 至 8.5,用双蒸水定容至 1000 mL。

试剂I:0.01%尿酸母液(称取0.01 g尿酸,用酶稀释液定容至100 mL)。

试剂II:0.001%尿酸溶液(取10 mL试剂I,用酶稀释液定容至100 mL)。

样品:用酶稀释液将酶稀释至0.05-0.10U/mL。

操作步骤

1.将试剂II置于37℃水浴锅预热。

2.向3 mL比色皿中加入2 mL试剂II,0.5 mL双蒸水。加入0.5 mL待测酶液,混匀。

3.37℃反应,用分光光度计在290 nm检测样品1 min内的吸光度变化(ΔAs)。

*用酶稀释液替换酶液,其它步骤相同,记录空白的吸光度变化(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb

活力计算

3.0:反应液总体积(mL);

0.5:酶液体积(mL);

1.0:光路长度(cm);

df:稀释倍数;

C:酶浓度(mg/mL);

12.2:尿酸在290 nm处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。