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技术指标

外观:白色无定型冻干粉末; 蛋白纯度:≥90%;比活性: ≥4 U/mg 酶粉;过氧化氢酶: ≤0.03%;NADH/NADPH oxidase:≤0.01%

酶学性质

来源:微生物; 分类: EC 1.7.3.3; 分子量: 40 kDa(SDS-PAGE); 等电点: 5.1; Km值: 2.1×10-5 M(Urate); 抑制剂: Fe3+,Co2+, Cu2+,Mn2+,Zn2+; 最适: pH 8.5; 最适温度: 37℃; pH稳定性 5.5-10.0(25℃,16 h); 热稳定性 60℃ 以下稳定(pH 8.5,30 min); 稳定性: -25~-15℃ 静置保存 12 个月保持; 80% 以上活性;保护剂:硼酸盐、EDTA及非离子型表面活性剂.

用途: 用于尿酸试剂的研发和大量配制。

活性测定方法:Uric acid+O2+2H2O Allantoin+CO2+H2O2尿酸(Uric acid)的量可用分光光度计在290nm下检测。

酶活定义: 单位酶活定义为在下述反应条件下,每分钟氧化1μmol尿酸所需的酶量。

试剂准备

酶稀释液:在 800 mL 双蒸水中溶解 3.09 g 硼酸,0.37 g EDTA·Na2·2H2O 和 0.01 g TritonX-100,用 NaOH 调节 pH 至 8.5,用双蒸水定容至 1000 mL。

试剂I:0.01% 尿酸母液(称取 0.01 g 尿酸,用酶稀释液定容至 100 mL)。

试剂II:0.001% 尿酸溶液(取 10 mL 试剂 I,用酶稀释液定容至 100 mL)。

样品:用酶稀释液将酶稀释至 0.05-0.10U/mL。

操作步骤

1. 将试剂 II 置于 37℃ 水浴锅预热。

2. 向 3 mL 比色皿中加入 2 mL 试剂 II,0.5 mL 双蒸水。加入 0.5 mL 待测酶液,混匀。

3. 37℃反应,用分光光度计在 290 nm 检测样品 1 min 内的吸光度变化(ΔAs)。

*用酶稀释液替换酶液,其它步骤相同,记录空白的吸光度变化(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb

活力计算

3.0:反应液总体积(mL);

0.5:酶液体积(mL);

1.0:光路长度(cm);

df:稀释倍数;

C:酶浓度(mg/mL);

12.2:尿酸在 290 nm 处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。