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技术指标

外观: 白色或褐色无定形冻干粉末;蛋白纯度:≥90%; 比活性: ≥100 U/mg 酶粉;葡萄糖氧化酶: ≤0.01%;ATP酶: ≤0.005%; 过氧化氢酶: ≤0.001%.

酶学性质

来源:微生物,鞘磷脂酶;分类: EC 3.1.4.12; 分子量: 36kDa(SDS-PAGE); 等电点:8.6; Km值: 2.4×10-5 M(Sphingomyelin); 抑制剂:EDTA; 最适pH:8.0; 最适温度:45℃; pH稳定性:6.0-8.0(37℃,60min); 热稳定性: 40℃ 以下稳定(pH 7.5,30 min);稳定性 :-25~-15℃ 静置保存 12 个月保持 90% 以上活性.

用途: 用于小而低密度脂蛋白试剂的研发和大量配制。

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成 1μmol H2O2 所需的酶量。

试剂准备

试剂I:0.1 M Tris-HCl,pH 8.0。

试剂II:10 mM MgCl2 溶液。

试剂III:6 mM 鞘磷脂溶液:称取 45.8 mg 的鞘磷脂,溶于 10mL 的无菌水中(含 5% 的 Triton X-100)。

试剂IV:500 U/mL ALP溶液。

试剂V:120 U/mL CHO溶液。

试剂VI:1 kU/mL POD溶液,取1000 U 的 POD 溶于1mL 的双蒸水。

试剂VII:50 mM 4–AA 溶液。

试剂VIII:50 mM TOOS 溶液。

试剂IX:1.0 M NaCl 溶液。

试剂X:1%(W/V)Triton X-100 溶液。

酶稀释液:10 mM pH 8.0 Tris-HCl,含 0.1% Triton X-100 和 10 mM NaCl。

按如下配制反应混合物:试剂 II: 20mL; 试剂III:10mL;试剂VI:0.5mL; 试剂VII: 3mL; 试剂VIII: 3 mL;试剂IX:1mL; 试剂X: 10mL ;试剂I:定容至 90mL 样品:用酶稀释液将酶稀释至0.01U/mL。