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技术指标

外观:白色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥150 U/mg 酶粉;NADH/NADPH 氧化酶:≤0.1%;己糖激酶:≤0.001%;谷胱甘肽还原酶:≤0.001%;磷酸葡萄糖异构酶 ≤0.001%。

酶学性质

来源:微生物;分类:EC 1.1.1.49;分子量:57 kDa(SDS-PAGE);等电点:4.6;Km值:3.2×10-4M(NAD+);2.6×10-4 M(G-6-P);抑制剂SDS,Zn2+,Fe3+;最适pH 8.0。

最适温度:45℃;pH稳定性 5.5-10.0(25℃,16 h);热稳定性 40℃以下稳定 (pH 7.5,30 min);稳定性:-25~-15℃ 静置保存 12 个月保持 90% 以上活性;保护剂:BSA。

用途:用于 CKMB,CK 等试剂的研发和大量配制。

酶活定义

单位酶活定义为在下述反应条件下每分钟生成 1μmol NADH 所需的酶量。

试剂准备

试剂I:55 mM Tris-HCl,pH 7.8,含 3.3 mMMgCl2。

试剂II:60 mM NAD+ 溶液。

试剂III:0.1 M D- 葡萄糖-6-磷酸-二钠。

酶稀释液:5 mM,pH 7.5 Tris HCl,含0.1%BSA。

操作步骤

1.分别取2.7 mL 试剂I、0.1 mL 试剂II 和 0.1mL 试剂III,混匀并在37℃预热5min。

2.加入0.1 mL 待测酶液,混匀。

3.37℃ 反应,用分光光度计在 340 nm 检测样品 1 min 内的吸光度变化(ΔAs)。

*用酶稀释液替换待测酶液,其它步骤相同,记录空白的吸光度变化(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb