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技术指标

外观:黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥20 U/mg酶粉;葡萄糖-6-磷酸脱氢酶:≤0.01%;乳酸脱氢酶:≤0.01%;

酶学性质

来源:微生物;分类:EC 4.4.1.8;分子量:54 kDa(SDS-PAGE);等电点:6.0;Km值:1.6×10-3 M(L-Cystathionine);抑制剂:不受NaN3抑制;最适pH:8.0;最适温度:50℃;pH稳定性:6.0-10.0(25℃,16 h);热稳定性:45℃以下稳定(pH 8.0,30 min);稳定性:-25~-15℃静置保存12个月保持;90%以上活性;稳定剂:Triton X-100,甘油.

用途:用于同型半胱氨酸试剂的研发和大量配制。

酶活定义:在规定活力检测条件下,每分钟消耗1μmolNADH所需的酶量。

试剂准备

试剂I:在100 mM pH 8.0 Tris-HCl缓冲液中,加入DL-胱硫醚至终浓度3.5mM,NADH至终浓度0.15 mM,磷酸吡多醛至终浓度0.05 mM,LDH至终浓度10 U/mL。

试剂II:50 mM pH 8.0 Tris-HCl缓冲液。待测样品:用试剂II将酶液稀释至0.8-2.4U/mL。

操作步骤

1.在1 mL比色皿中加入1 mL试剂I,37℃水浴5 min。

2.加入20μL待测样品,混匀。

3.37℃反应,340 nm测定1 min内吸光度变化ΔAs。

*用试剂II代替待测样品,其它步骤相同,测定1 min内的吸光度变化ΔAb。ΔA=ΔAs-ΔAb