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技术指标

外观: 白色无定型冻干粉末; 蛋白纯度: ≥90%; 比活性:≥1000 U/mg 酶粉; 丙酮酸激酶:≤0.5%; 乳酸脱氢酶:≤0.01%; 谷氨酸草酸酯转氨酶: ≤0.01%

酶学性质

来源:微生物, 苹果酸脱氢酶; 分类EC 1.1.1.37; 分子量 35kDa(SDS-PAGE); 等电点5.61; Km值:7.8×10-5 M(Oxaloacetate); 1.2×10-4 M(NADH); 抑制剂:Hg2+; 最适pH:8.0-9.0; 最适温度:60℃; pH稳定性pH 4.0-9.0(25℃,16 h) 热稳定性:50℃ 以下稳定(pH 7.5,30 min); 稳定性:-25~-15℃ 静置保存 12 个月保持90% 以上活性. 用途: 用于谷草转氨酶试剂的研发和大量制备。

酶活定义: 单位酶活定义为在下述反应条件下每分钟消耗 1μmol NADH 所需的酶量。

试剂准备

试剂I:100 mM pH 7.5磷酸钾缓冲液。

试剂II:15 mM草酰乙酸(2.0 mg/mL草酰乙酸,用冷的试剂I溶解)。

试剂III:6.0 mM NADH。

试剂IV:100 mM磷酸钾缓冲液,pH7.5,含0.2%BSA。

待测样品:用试剂IV将酶液稀释至0.05-0.5U/mL。

操作步骤

1.在3 mL比色皿中加入2.8 mL试剂I,0.1mL试剂II,0.1 mL试剂III,30℃预热5 min。

2.加入50μL待测样品,混匀。

3.在340 nm处测定30℃下,1分钟内吸光度的变化率。