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技术指标

外观:无色透明液体;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥5 U/mL;β-N-乙 酰葡糖胺糖苷酶:≤0.2%;α- 甘露糖苷酶:≤0.05%;β- 半乳糖苷酶:≤0.1%

酶学性质

来源:微生物;分类:EC 3.2.1.51;分子量:55 kDa(SDS-PAGE);等电点:6.2;最适pH:7.5;最适温度:80℃;pH稳定性:7.0-10.0(25℃,16 h);热稳定性:90℃ 以下稳定(pH 8.0,30 min);稳定性:-25~-15℃ 静置保存 12 个月保持 90% 以上活性。

用途

用于岩藻糖苷酶等试剂校准、质控品的研发和大量配制。

酶活定义

单位酶活定义为在下述条件下,每分钟水解1μmol CNP-AFU所需的酶量。

试剂准备

试剂I:20mM pH 8.0 Tris-HCl。

试剂II:10mM CNP-AFU溶液(用 DMSO 溶解)。

酶稀释液:20mM pH 8.0 Tris-HCl。

操作步骤

1. 向 1mL 比色皿中加入 940μL 的试剂 I 和 50μL 试剂 II。

2. 将反应混合物在 37℃ 预热 5 min。

3. 加入 10μL 待测酶液,混匀。

4. 在 405nm 处测定 37℃ 反应,记录 1 min 内的吸光度变化(ΔAs)。

*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb