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技术指标

外观: 白色无定型冻干粉末;蛋白纯度: ≥90%; 比活性:≥300 U/mg 酶粉;苹果酸脱氢酶: ≤0.002%; 乳酸脱氢酶:≤0.002%; NADH 氧化酶: ≤0.002%

酶学性质

来源:微生物;分类:EC 1.1.1.30; 分子量:27 kDa(SDS-PAGE); 等电点:6.1;Km值:1.46×10-2 M;(D-3-Hydroxybutyrate),9.5×10-5 M(NAD+); 抑制剂:Hg2+,Ag+,SDS

最适pH:8.5;最适温度:60℃; 用途:用于 β- 羟丁酸试剂的研发和大量配制。

酶活定义:单位酶活定义为在下述反应条件下,每分钟生成 1μmol NADH 所需的酶量。

试剂准备

试剂I:100 mM pH 8.5 Tris-HCl 缓冲液。

试剂II:158 mM 3- 羟丁酸钠溶液(用试剂I溶解)。

试剂III:27.9 mM NAD+(用试剂I溶解)。

试剂IV:100 mM Tris-HCl,pH 8.5,含0.1%BSA。

待测样品:用试剂 IV 将酶液稀释至 0.1-0.5U/mL。

操作步骤

1.在3 mL比色皿中加入 2.3 mL 试剂I,0.5mL 试剂II,0.2 mL试剂III,37℃ 预热 5 min。

2.加入100μL待测样品,混匀。

3.在340nm处37℃反应,记录1 min内的吸光度变化(ΔAs)

*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb